BACKGROUND The genus Flavivirus includes a variety of medically important viruses, including dengue virus (DENV) and Zika virus (ZIKV), which are most prevalent in Brazil. Because the clinical profile of patients affected by different DENV serotypes or ZIKV may be similar, the development of new methods that facilitate a rapid and accurate diagnosis is crucial. OBJECTIVES The current study aimed to develop an improved reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) protocol for universal detection of flaviviruses by using semi-nested primers that discriminate between DENV serotypes and ZIKV. METHODS The bioinformatics workflow adopted for primer design included: (1) alignment of 1,442 flavivirus genome sequences, (2) characterisation of 27 conserved regions, (3) generation of a primer set comprising 77 universal primers, and (4) selection of primer pairs with greatest coverage and specificity. Following primer design, the reaction was validated in vitro. The same approach was applied to the design of primers specific for DENV and ZIKV, using a species-specific sequence database. FINDINGS The new assay amplified an 800-806 nt variable region of the NS5 gene and allowed discrimination of virtually all flavivirus species using reference-sequence comparison. The 800-806 nt fragment was validated as a template for a semi-nested multiplex PCR using five additional primers for the detection of DENV and ZIKV. These primers were designed to generate amplicons of different sizes, allowing differentiation of the four serotypes of DENV, and ZIKV using agarose gel electrophoresis. MAIN CONCLUSIONS The bioinformatics pipeline allowed efficient primer design, making it possible to identify the best targets within the coding region of the NS5 protein. The multiplex system proved effective in differentiation of DENV1-4 and ZIKV on a 2% agarose gel. The possibility of discriminating DENV serotypes and ZIKV in the same reaction provided a faster result consuming less sample. In addition, this simplified approach ensured the reduction of the cost per analysis.

Objective: To characterize the socioeconomic and demographic aspects of sickle cell disease patients from the state of Rio Grande do Norte (RN), Northeast Brazil, and their adherence to the recommended treatment. Methods: This cross-sectional descriptive study was performed at referral centers for the treatment of hematological diseases. One hundred and fifty-five unrelated individuals with sickle cell disease who went to these centers for outpatient visits were analyzed. All the patients, or their caregivers, were informed about the research procedures and objectives, and answered a standardized questionnaire. Results: The patients were predominantly younger than 12 years old, self-declared as mulatto, lived in small towns fairly distant from the referral center, and had low education and socioeconomic levels. Individuals who were ten or younger were diagnosed at an earlier age. Almost 50% of the patients were taking hydroxyurea, 91.4% reported having received pneumococcal/meningococcal vaccinations and 76.1% received penicillin as antibiotic prophylaxis. However, the majority of them reported having difficulties following the recommendations of the physicians, mainly in respect to attaining the prescribed medications and transportation to the referral centers. Conclusion: These individuals have a vulnerable socioeconomic situation that can lead to an aggravation of their general health and thus deserve special attention from the medical and psychosocial perspectives. Thus, it is necessary to improve public policies that provide Brazilian sickle cell disease patients with better access to medical treatment, living conditions, and integration into society.

OBJETIVO: Analisar conhecimentos, atitudes e práticas das mulheres em relação ao exame citológico de Papanicolaou e a associação entre esses comportamentos e características sociodemográficas MÉTODOS: Inquérito domiciliar com abordagem quantitativa. Foram entrevistadas 267 mulheres com idade de 15 a 69 anos, selecionadas de forma estratificada aleatória, residentes no município de São José do Mipibu, RN, em 2007. Utilizou-se questionário com perguntas pré-codificadas e abertas, cujas respostas foram descritas e analisadas quanto à adequação dos conhecimentos, atitudes e prática das mulheres em relação ao exame preventivo de Papanicolaou. Foram realizados testes de associação entre as características sociodemográficas e os comportamentos estudados, com nível de significância de 5%. RESULTADOS: Apesar de 46,1% das mulheres entrevistadas terem mostrado conhecimento adequado, proporções de adequação significativamente maiores foram observadas em relação às atitudes e prática quanto ao exame: 63,3% e 64,4%, respectivamente. O maior grau de escolaridade apresentou associação com adequação dos conhecimentos, atitudes e prática, enquanto as principais barreiras para a realização do exame relatadas foram descuido, falta de solicitação do exame pelo médico e vergonha. CONCLUSÕES: O médico é a principal fonte de informação sobre o exame de Papanicolau. Entretanto, mulheres que vão a consultas com maior freqüência, embora apresentem prática mais adequada do exame, possuem baixa adequação de conhecimento e atitude frente ao procedimento, sugerindo que não estejam recebendo as informações adequadas sobre o objetivo do exame, suas vantagens e benefícios para sua saúde.

OBJECTIVE: To assess the knowledge, attitudes and practices of women related to the Pap test and the association between these behaviors and sociodemographic characteristics. METHODS: A household survey with quantitative approach was conducted. A total of 267 women aged 15 to 69 years, randomly selected in a stratified manner, living in the city of São José de Mipibu, Northeastern Brazil, were interviewed in 2007. A questionnaire consisting of pre-coded open questions was administered and answers were described and analyzed, as for adequacy of knowledge, attitudes, and practices of women regarding the Pap test. Tests of association were carried out between sociodemographic characteristics and behaviors studied at a 5% significance level. RESULTS: Although 46.1% of the women interviewed showed adequate knowledge about the Pap test, a significantly higher proportion of adequacy was seen regarding attitudes and practices, 63.3% and 64.4%, respectively. Higher schooling was associated with adequacy of knowledge, attitudes, and practices. The main barriers to the Pap test were negligence, non-requesting by their physicians, and shame. CONCLUSIONS: The physician is the main source of information about the Pap test. However, women who more often attend medical visits, despite their good practice, show low adequacy of knowledge and attitudes related to the Pap test, which indicates that they are not receiving appropriate information on the test's purpose, advantages and benefits to women's health.

OBJETIVO: Analizar conocimientos, actitudes y prácticas de las mujeres con relación al examen citológico de Papanicolaou y su asociación entre comportamientos y características sociodemográficas. MÉTODOS: Pesquisa domiciliar con abordaje cuantitativo. Fueron entrevistadas 267 mujeres con edad de 15 a 69 años, seleccionadas de forma estratificada aleatoria, residentes en el municipio de São José do Mipibu, Noreste de Brasil, en 2007. Se utilizó cuestionario con preguntas pre-codificadas y abiertas, cuyas respuestas fueron descritas y analizadas con relación a la adecuación de los conocimientos, actitudes y práctica de las mujeres con relación al examen preventivo de Papanicolaou. Fueron realizadas exámenes de asociación entre las características sociodemográficas y los comportamientos estudiados, con nivel de significancia de 5%. RESULTADOS: A pesar de 46,1% de las mujeres entrevistadas haber mostrado conocimiento adecuado, proporciones de adecuación significativamente mayores fueron observadas con relación a las actitudes y práctica con respecto al examen: 63,3% y 64,4%, respectivamente. El mayor grado de escolaridad presentó asociación con adecuación de los conocimientos, actitudes y práctica, con relación a las principales barreras para la realización del examen relatadas fueron descuido, falta de solicitud del examen por el médico y vergüenza. CONCLUSIONES: El médico es la principal fuente de información sobre el examen de Papanicolaou. Mientras tanto, mujeres que van a consultas con mayor frecuencia, a pesar de presentar práctica más adecuada del examen, poseen baja adecuación del conocimiento y actitud frente al procedimiento, sugiriendo que no están recibiendo las informaciones adecuadas sobre el objetivo del examen, sus ventajas y beneficios para su salud.

OBJETIVO: Analisar conhecimentos, atitudes e práticas das mulheres em relação ao exame citológico de Papanicolaou e a associação entre esses comportamentos e características sociodemográficas MÉTODOS: Inquérito domiciliar com abordagem quantitativa. Foram entrevistadas 267 mulheres com idade de 15 a 69 anos, selecionadas de forma estratificada aleatória, residentes no município de São José do Mipibu, RN, em 2007. Utilizou-se questionário com perguntas pré-codificadas e abertas, cujas respostas foram descritas e analisadas quanto à adequação dos conhecimentos, atitudes e prática das mulheres em relação ao exame preventivo de Papanicolaou. Foram realizados testes de associação entre as características sociodemográficas e os comportamentos estudados, com nível de significância de 5%. RESULTADOS: Apesar de 46,1% das mulheres entrevistadas terem mostrado conhecimento adequado, proporções de adequação significativamente maiores foram observadas em relação às atitudes e prática quanto ao exame: 63,3% e 64,4%, respectivamente. O maior grau de escolaridade apresentou associação com adequação dos conhecimentos, atitudes e prática, enquanto as principais barreiras para a realização do exame relatadas foram descuido, falta de solicitação do exame pelo médico e vergonha. CONCLUSÕES: O médico é a principal fonte de informação sobre o exame de Papanicolau. Entretanto, mulheres que vão a consultas com maior freqüência, embora apresentem prática mais adequada do exame, possuem baixa adequação de conhecimento e atitude frente ao procedimento, sugerindo que não estejam recebendo as informações adequadas sobre o objetivo do exame, suas vantagens e benefícios para sua saúde.

OBJECTIVE: To assess the knowledge, attitudes and practices of women related to the Pap test and the association between these behaviors and sociodemographic characteristics. METHODS: A household survey with quantitative approach was conducted. A total of 267 women aged 15 to 69 years, randomly selected in a stratified manner, living in the city of São José de Mipibu, Northeastern Brazil, were interviewed in 2007. A questionnaire consisting of pre-coded open questions was administered and answers were described and analyzed, as for adequacy of knowledge, attitudes, and practices of women regarding the Pap test. Tests of association were carried out between sociodemographic characteristics and behaviors studied at a 5% significance level. RESULTS: Although 46.1% of the women interviewed showed adequate knowledge about the Pap test, a significantly higher proportion of adequacy was seen regarding attitudes and practices, 63.3% and 64.4%, respectively. Higher schooling was associated with adequacy of knowledge, attitudes, and practices. The main barriers to the Pap test were negligence, non-requesting by their physicians, and shame. CONCLUSIONS: The physician is the main source of information about the Pap test. However, women who more often attend medical visits, despite their good practice, show low adequacy of knowledge and attitudes related to the Pap test, which indicates that they are not receiving appropriate information on the test's purpose, advantages and benefits to women's health.

OBJETIVO: Analizar conocimientos, actitudes y prácticas de las mujeres con relación al examen citológico de Papanicolaou y su asociación entre comportamientos y características sociodemográficas. MÉTODOS: Pesquisa domiciliar con abordaje cuantitativo. Fueron entrevistadas 267 mujeres con edad de 15 a 69 años, seleccionadas de forma estratificada aleatoria, residentes en el municipio de São José do Mipibu, Noreste de Brasil, en 2007. Se utilizó cuestionario con preguntas pre-codificadas y abiertas, cuyas respuestas fueron descritas y analizadas con relación a la adecuación de los conocimientos, actitudes y práctica de las mujeres con relación al examen preventivo de Papanicolaou. Fueron realizadas exámenes de asociación entre las características sociodemográficas y los comportamientos estudiados, con nivel de significancia de 5%. RESULTADOS: A pesar de 46,1% de las mujeres entrevistadas haber mostrado conocimiento adecuado, proporciones de adecuación significativamente mayores fueron observadas con relación a las actitudes y práctica con respecto al examen: 63,3% y 64,4%, respectivamente. El mayor grado de escolaridad presentó asociación con adecuación de los conocimientos, actitudes y práctica, con relación a las principales barreras para la realización del examen relatadas fueron descuido, falta de solicitud del examen por el médico y vergüenza. CONCLUSIONES: El médico es la principal fuente de información sobre el examen de Papanicolaou. Mientras tanto, mujeres que van a consultas con mayor frecuencia, a pesar de presentar práctica más adecuada del examen, poseen baja adecuación del conocimiento y actitud frente al procedimiento, sugiriendo que no están recibiendo las informaciones adecuadas sobre el objetivo del examen, sus ventajas y beneficios para su salud.

Foram analisados espécimes cervicais de 202 mulheres, com idade variando de 15 e 64 anos, atendidas no Hospital Luis Antonio, Natal-RN, objetivando determinar a prevalência do HPV, identificar genotipos do vírus e possíveis fatores de risco para a infecção por esse patógeno, em mulheres atendidas em um serviço de rastreamento do câncer do colo do útero. De cada paciente foram coletados dois espécimes: um destinado ao exame citológico e outro para detecção do HPV por PCR, com tipagem por hibridização "dot blot". Das pacientes incluídas no estudo, 54,5% apresentaram citologia normal e 45,5% tinham alterações citológicas. HPV foi detectado em 24,5% das mulheres com citologia normal, e em 59,8% das que apresentaram citologia alterada. Tanto a infecção por um único tipo de HPV, quanto a infecção simultânea por dois tipos diferentes do vírus aumentaram a chance de ocorrência de alterações citológicas. Foram identificados treze tipos de HPV, a maioria de alto risco. Nas infecções por um único tipo, o HPV 16 foi o mais prevalente, seguido do HPV 58. Na infecção dupla a associação mais freqüente foi entre HPV 56 e 57. A prevalência do HPV nas mulheres com citologia normal foi superior a relatada para países de todos os continentes, exceto África. Nas mulheres com alterações citológicas observou-se resultado inverso. A distribuição dos tipos de HPV foi semelhante à descrita para Américas, com algumas diferenças. Dos fatores de risco analisados, o relacionamento sexual com múltiplos parceiros foi o único que apresentou associação com a presença de infecção por HPV.

We analyzed cervical specimens of 202 women, aged 15 to 64 years, attended at Luis Antonio Hospital, Natal, Brazil, to determine the prevalence of HPV and identify the more frequent genotypes and risk factors for HPV infection in women attended at a cervical cancer screening service. Two specimens were collected from each patient: one for cytological examination and the other to detect HPV DNA by PCR, and typing by dot blot hybridization. A total of 54.5% of the sample had normal cytology and 45.5% had cytological alterations. HPV was detected in 24.5% of the cytologically normal women and in 59.8% of those with altered cytology. Both single and double HPV infection increased the likelihood of cytological alterations. Thirteen types of HPV were identified, most of which were high risk. HPV 16 was the most prevalent single-type infection, followed by HPV 58. The most frequent double infection was the association between HPV 56 and 57. The prevalence of HPV in cytologically normal women was greater than that reported for countries on all the continents except Africa. The inverse was observed in women with cytological alterations. The distribution of HPV types was similar to that described for the Americas, with some differences. Multiple sexual partners was the only risk factor showing an association with the presence of HPV infection.

OBJETIVO: Padronizar um método alternativo para extração de DNA a partir de tecido fixado em formol e conservado em arquivos de blocos de parafina, visando à realização de estudos retrospectivos. MÉTODOS: Comparou-se a eficiência de protocolos de extração de DNA a partir de tecido parafinado, para análise por reação em cadeia de polimerase (PCR), tomando-se como parâmetro um protocolo baseado em um kit comercial. Foram feitas extrações do DNA de 60 espécimes por três métodos: o protocolo A, baseado no kit GlassMAX; o B, utilizando-se o kit GFX TM; e o C, tendo como base o método de Banerjee et al.(2). A integridade e a suficiência do DNA presente na amostra foram avaliadas pela amplificação por PCR de um segmento de 110pb do gene da beta-globina humana, com visualização por meio de eletroforese em gel de poliacrilamida, corado pela prata. Resultados: Das 60 amostras analisadas, 45 apresentaram resultado positivo na PCR quando o DNA foi extraído por qualquer um dos três protocolos. Em seis amostras, a amplificação foi positiva apenas para o DNA extraído pelos protocolos A e C. Em três amostras, o resultado foi positivo apenas para o DNA extraído pelo protocolo A, e em duas, apenas para o DNA extraído pelo protocolo C. CONCLUSÕES: O protocolo C apresentou desempenho semelhante ao do protocolo A, com as vantagens de apresentar menor custo, dispensar o uso de kit comercial, além de não utilizar solventes orgânicos, revelando-se uma alternativa viável para a obtenção de DNA a partir de tecido fixado em formol e incluído em parafina.

OBJECTIVE: To set up a method for DNA extraction from paraffin embedded cervical cancer specimens, previously formalin-fixed, aiming to accomplish retrospective analysis. METHODS: Sixty specimens were submitted to DNA extraction by three different methods. All of them involved digestion of the tissues by proteinase K, followed by DNA purification, based in three different approaches: protocol A used a DNA isolation kit, GlassMax (Gibco/BRL); protocol B was performed with the kit GFX TM Amersham Pharmacia Biotech; and protocol C was based on the method proposed by Banerjee et al.(2), with modifications. To evaluate the integrity and sufficiency of the DNA, the samples were submitted to a in vitro amplification of a segment of the human beta-globin gene, and the PCR products were analyzed by electrophoresis on 7% polyacrylamide gels, followed by silver staining. Results: Among 60 analyzed samples, 45 showed positive results when submitted to the three protocols. In six samples, PCR fragments were obtained with DNAs extracted through protocols A e C; in three samples, DNA extraction was achieved with protocol A only; and in two samples the DNA was successfully extracted only through protocol C. CONCLUSIONS: Protocols A and C generated similar results. Although protocol C is more labor-intensive and time consuming, it does not require a commercial kit and therefore has a lower cost. Furthermore, it does not require the use of organic solvents and may be considered a good alternative for DNA extraction from paraffin embedded tissues.

Objetivo: avaliar o estado imune de mulheres em idade reprodutiva, em relação ao vírus da rubéola. Métodos: foram analisadas alíquotas de soros de 2.243 mulheres na faixa etária dos 15 aos 45 anos (média de 26 anos), residentes na área urbana de Natal, RN, para avaliação do estado imune em relação ao vírus da rubéola. Do total das mulheres examinadas, 1.170 (52,1%) eram gestantes e 1.073 (47,9%) não-gestantes. Foi pesquisada a presença de anticorpos das classes IgM e IgG no soro de todas as pacientes, empregando-se a técnica de ELISA em fase sólida, revelada mediante fluorescência (ELFA). Resultados: do total das pacientes analisadas, 1.632 se apresentaram imunes e 611 se mostraram suscetíveis ao vírus da rubéola. Os índices médios de imunidade e de suscetibilidade observados nos 4 anos estudados foram 73,0 e 27,0% respectivamente. No grupo das mulheres consideradas suscetíveis, 14,5% não apresentaram qualquer sinal da presença de anticorpos contra o vírus da rubéola, 7,7% apresentaram anticorpos da classe IgM isoladamente e em 4,8% delas foi detectada a presença simultânea de anticorpos IgM e IgG. Conclusão: os achados revelaram que uma parcela significativa da população feminina de Natal, em idade reprodutiva, ainda se encontra suscetível ao vírus da rubéola, revelando a existência real de risco de infecção congênita por esse patógeno. Recomenda-se a vacinação seletiva dessas mulheres contra a rubéola, como forma segura de prevenir as manifestações relacionadas à síndrome de rubéola congênita.

Purpose: to evaluate the immune status of women in reproductive age regarding the rubella virus. Methods: 2,243 samples of serum from women in the age range of 15 to 45 years, with an average of 26 years, living in the urban area of Natal, RN were analyzed, to evaluate the immune status in regard to rubella virus. Of these women, 1,170 (52.1%) were pregnant and 1,073 (47.9%) were not. IgM and IgG antibodies were determined, using solid phase ELISA and fluorescence (ELFA) techniques. Results: of the 2,243 women, 1,632 showed immunity to rubella virus and 611 did not, therefore being susceptible to this virus. The rates of immunity and susceptibility in this study were 73.0% and 27.0%, respectively. In 611 susceptible woman, 14.5% did not present antibodies against rubella virus, 7.7% had only IgM antibody and 4.8% had IgG and IgM antibodies. Conclusions: our findings show that a significant group of women from Natal, in reproductive age, is still susceptible to rubella virus, indicating the risk of congenital infection by this pathogen. We advise the selective vaccination of those women against rubella to prevent clinical manifestations related to the congenital form of the disease.